Homogeneizador ultrasónico de Scientz con caja Soundproo

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¿Cuáles son las condiciones para la sonicación de Streptomyces (actinomycetes)?

Analítica: los actinomicetos pertenecen al porcentaje molar (G + C) (% en moles) del árbol filogenético del sistema procariótico

una rama del género Eubacteria, que tiene características moleculares y biológicas únicas de los procariotas,

Sin embargo, en sus diferentes grupos, la composición química de la pared celular varía enormemente. En la ecografía de E. coli, se usan 400W, y el método de romper 5s durante 5s es bueno, pero se usa en Streptomyces, y no tiene efecto debido a la diferencia en la composición de la pared celular. El tratamiento previo a la hilatura de Streptomyces (actinomicetos) generalmente se configura para una cierta concentración de suspensión bacteriana.

Las condiciones específicas para la trituración con el disruptor celular ultrasónico son: recoger las bacterias en la solución de cultivo de 24 h a 5 000 r / min durante 5 min para recolectar las células; se lava con el tampón Na2HPO-NaH2PO de pH 7,5 por 3 veces y luego se utiliza El tampón se formula en una suspensión bacteriana 1: 3. Se coloca en un tubo de ensayo de plástico grande de 40 ml; coloque el tubo de ensayo de plástico grande en un baño de hielo y triture con un disruptor celular ultrasónico (200 vatios de potencia, sonda de 1/2 ", aplastado durante 30 s, 30 s intermitentes); solución de trituración a 12 000 r / min. Centrifugar durante 30 min a alta temperatura velocidad, recoja los residuos celulares y el sobrenadante. Las células de lavado también se pueden lavar una vez con solución salina enfriada previamente o Tris-HCl a pH 8. Además, la dosis ultrasónica varía con la cantidad de muestra y bacterias. La potencia puede ser de 400-600 w , triturado durante 5 s, detenido durante 5 s, se agrega baño de hielo y se agrega la concentración final de PMSF 1 mM. Para determinar la intensidad y frecuencia ultrasónicas apropiadas, es necesario verificar si las bacterias están completamente rotas en algún momento.

Lo que tengo que hacer es la tasa de liberación de LDH (lactato deshidrogenasa), es decir, sobrenadante / célula + sobrenadante, pero en la célula

¿Necesitas romper las celdas cuando LDH, a qué debes prestar atención cuando rompes?

Análisis: 1. El ultrasonido debe llevarse a cabo en un baño de hielo;

2. La potencia ultrasónica tiene una gran relación con el diámetro interior del contenedor: el diámetro interno es pequeño, la potencia requerida también es pequeña y no es fácil causar burbujas de aire;

Por el contrario, puede causar desnaturalización de proteínas;

3. Agregar algunos inhibidores de la proteasa antes del ultrasonido es beneficioso para proteger la actividad de la proteína de interés;

4. Tiempo de ultrasonido 5 ', espacio libre 15-20', tiempo total de 20min aproximadamente.

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