Programa de preparación de muestras de ADN residual de la célula huésped
May 21, 2021
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Los fármacos de proteínas recombinantes, los fármacos de anticuerpos, las vacunas y otros productos en productos biológicos se expresan y producen mediante líneas celulares continuas. Aunque se han sometido a estrictos procesos de purificación, todavía puede haber fragmentos residuales de ADN de la célula huésped (ADNr) en los productos.
Estos ADNr pueden afectar la función de los genes clave del receptor, lo que conlleva el riesgo de infección o tumorigenicidad.
Por lo tanto, es particularmente importante cómo obtener de manera eficiente y estable las trazas de ADNr en la muestra. En la actualidad, existen principalmente los siguientes métodos:
| Métodos | Ventaja | Desventaja |
| Fenol / Cloroformo | Alta pureza de ADN y alto contenido. | Pasos laboriosos, laboriosos y tóxicos |
| Precipitación de yoduro de sodio | fácil de usar | Contenido de ADN inestable y que consume mucho tiempo |
| Método de columna | Pureza simple y alta | Requiere mucho tiempo y es difícil de automatizar |
| Método de cuentas magnéticas | Simple, de alta pureza, se puede automatizar | - |
![NP-2032[1]](/Content/uploads/2021213197/20210522104030d04d958e72634ed5a62eff19fd61da6f.png "NP-2032[1]") |
Este esquema de tratamiento se basa en el principio del método de perlas magnéticas y se utiliza en el sistema de pretratamiento de rDNA de productos biológicos, que puede realizar un sistema de pretratamiento eficiente, simple y automatizado.
El instrumento de extracción automática de ácido nucleico SCIENTZ está equipado con una conocida marca de kit de pretratamiento de muestras de ADN residual de células huésped (método de perlas magnéticas), y la tasa de recuperación de varias muestras es estable hasta más del 80%, lo que puede controlar de manera estable y eficaz el contenido residual de ADN de la célula huésped en varios productos biológicos
Programa experimental
Materiales experimentales: instrumento de extracción automática de ácido nucleico (NP-2032), instrumento de PCR cuantitativa fluorescente (LightCycler480), kit de pretratamiento de muestra de ADN residual de la célula huésped (método de perlas magnéticas), kit de detección de número de copias del gen CAR / TCR (PCR multiplex - Método de sonda de fluorescencia )
Muestras experimentales: muestras de retrovirus, muestras de células CAR-T, control negativo
Pasos experimentales:
Para la supervisión.
Preparación de experimentos, preparación de muestras, preparación de extracción, inicio del programa, detección de contenido residual total
Observaciones: El instrumento funciona durante unos 30 minutos.
Resultados experimentales:
| Nombre de la muestra | MeanCp | MeanConc | Cantidad recuperada | Escalar | Índice de recuperación |
| Control negativo | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Control negativo + (portátil) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Control negativo | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Muestra de virus + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Muestra de celda | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Resultados experimentales:
El procesamiento automatizado de diferentes muestras tiene resultados estables y eficientes;
La eficiencia de la automatización del procesamiento por lotes es mayor que la eficiencia de la extracción manual;
Cumple con los requisitos de la nueva tasa de recuperación de USP; puede ser un buen ayudante para el preprocesamiento de la detección del ADNr en productos biológicos.
Pantalla del producto:
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