Problemas comunes cuando el homogeneizador ultrasónico se rompe Escherichia coli

E. coli expresa proteína extraña. Cuando se somete a sonicación, se suspende en PBS que contiene 1% de triton-X-100. El efecto ultrasónico es mejor. El efecto del 1% de triton-X-100 sigue siendo obvio. Obras, como Streptomyces.

La precipitación bacteriana agrega directamente la muestra 1 tampón, agrega 5 ml de mercaptoetanol, mezcla, centrifuga, hierve durante 10 minutos, carga directa, tinción y decoloración son las siguientes: ponga el pegamento en la cantidad apropiada de líquido de teñido en el horno de microondas durante 1 minuto, la tintura La solución se reemplaza por una gran cantidad. El agua se puede cocinar en el microondas durante 10 minutos.

Después de expresar la proteína recombinante, las células se rompieron por una onda ultrasónica, usando un baño de hielo, 400W y 2S parados durante 1S, pero se generó una gran cantidad de espuma en un corto tiempo, lo que afectó la eficiencia de trituración. Ambas pbs y tris tampones fueron iguales, y finalmente la trituración fue incompleta. Pero mi proteína objetivo se encuentra en estas células ininterrumpidas, lo que me impide obtener resultados experimentales.

Déjame darte un análisis de por qué esta situación y solución.

1. Se generarán burbujas porque la posición de la sonda no está bien colocada, la sonda debe estar cerca del fondo, aproximadamente 1 cm (por lo general estoy a 0.5 cm del fondo), el instrumento tendrá diferentes niveles de potencia, pero puede observar la Página, hay fluctuaciones pero no seas demasiado agresivo.

2. Super 3S detiene 10S, ultrasonido unas 20 veces para ver el efecto

3. Preste atención a la posición de la bocina. Si no estás en lo correcto, debes ajustarlo a tiempo. Además, desde la perspectiva de la concentración de bacterias, intente aumentar el volumen al triturar, la fuerza no debe exceder el 60%.

4. Prueba 8S para Super 8S. Para algunas proteínas bacterianas, su método es difícil de disipar el calor, lo que resulta en la desnaturalización de las proteínas y la generación de burbujas. Es mejor hacer una pausa un poco más. Esto es más común en la forma de cuerpos de inclusión.